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elisa试剂盒价格
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ELISA试剂盒操作中各疑难问题 双赢生物专业技术团队来帮您
点击次数:930 更新时间:2015-09-15
 

ELISA试剂盒(酶联免疫试剂盒)操作中各疑难问题 双赢生物专业技术团队来帮您

操作过程的控制:

⑴ 严格按照试剂说明书进行操作。操作前将试剂在室温下平衡30~60min。

⑵ 加样后及时放人孵箱。标本较多时,要分批操作。按说明步骤严格控制操作时间,防止孵育时间人为延长,导致非特异性结合紧附于反应孔周围,难以清洗*。

(3)封板温育时,各孔一定要封严,防止阳性标本的液体蒸发,产生周边现象从而导致“花板"的出现。

(4)用洗板机洗板时,保证洗液注满各孔,洗板针畅通,洗完板后在吸水纸(选择干净、无或少尘的吸水材料)上轻轻拍干:还要防止针口有纤维蛋白或异物,这些异物在洗板的过程中易产生拖带现象而导致“花板"的出现。

(5)合理安排检测量,以免反应板过多造成洗板等待时间长。

(6)加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。

(7)显色剂尽量在临用前配制,坚持不用过期显色剂,肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用。

(8)加样时保持显色剂不外流;A、B液应避免接触金属器械。加终止液时应避免产生气泡。

(9)应保证C清洁,整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸。以上的措施可以使“花板"降至zui低限度。从而提高检测的特异性。并得到更准确、可靠的实验结果。

1、加样吸嘴的洁净与否和吸量的准确性,直接影响检测结果。由于吸嘴构造特殊,导致清洗困难,加大了交叉污染的机会。建议用一次性吸嘴。加样器也要经常清洗,定期校准。加样时应将所加物加在 ELISA 板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可溅出。

2、温浴影响,在建立 ELISA 方法作反应动力学研究时,实验表明,两次抗原 抗体 反应一般在37℃经1-2 小时,产物的生成可达。为避免蒸发,板上应加盖,也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔,反应板不宜叠放,以保证各板的温度都能迅速平衡。应注意温育的温度和时间应按规定力求准确。由于公司的 试剂 盒温育是在空气浴中完成,采用水浴会造成值偏高或花板。另外温育中还有边缘效应,边上的值会偏高,建议为了客观的判断结果,将质控放在非边缘位置。96孔酶标板结构特别;易产生边缘效应,抗原抗体结合及酶促反应对温度有严格要求,酶标板周围与内部孔升降温速率不同,造成周边与内部孔结果差异;干浴与水浴存在明显的差异,尽可能使用水浴,并要求固相板放入水中,减少受热不均,贴密封膜,防止污物浸入。

3、洗涤在 ELISA 过程中虽不是一个反应步骤,但却决定着实验的成败。ELSIA 就是靠洗涤来达到分离游离的和结合的酶标记物的目的。通过洗涤以清除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体结合的物质,以及在反应过程中非特异性地吸附于固相载体的干扰物质。聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的,而在洗涤时应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。可以说在ELISA 操作中,洗涤是zui主要的关键技术,应引起操作者的高度重视,操作者应严格按要求洗涤,不得马虎。

 
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